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細胞凍存步驟： 

細胞復(fù)蘇步驟： 

常見注意事項： （廣州市超博科技有限公司）

有關(guān) DMSO 的一些注意事項：?? 

DMSO 能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內(nèi)的離子 濃度、減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細胞損傷程度。 

DMSO 在溶解過程中會放熱，應(yīng)先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時凍存液需要提前配置， DMSO 現(xiàn)配對細胞的毒性可能更大； 

復(fù)蘇時，要離心去除 DMSO，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌 1-2 次，注意離心的時候速度不要太快； 

2.  血清需要比正常養(yǎng)細胞時多加，一般為 10%-20%。 

3.  解凍時，要盡快將凍存管整體溫度上升至 37 攝氏度，由于凍存管具有一定的厚度，故 而可以將水浴鍋的溫度調(diào)至 40 攝氏度左右，可以縮短解凍時間。 

4.  梯度凍存，即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的順序程序性降溫。 

知識點思維擴散： 

  1972 年，冷凍損傷的兩因素假說：冰晶損傷和溶液損傷假說被 Mazur 等人首先提出，

他們是根據(jù)中國倉鼠組織培養(yǎng)細胞的低溫保存實驗數(shù)據(jù)分析得到的。 

 冰晶損傷假說認為隨著溫度的下降，細胞內(nèi)外的水分結(jié)冰，所形成的冰晶會造成細胞膜

和細胞器的破壞并引起細胞死亡。這種因細胞內(nèi)部結(jié)冰而致的細胞損傷即就是冰晶損傷

(Intracellular ice damage)。冰晶損傷是由冷卻速度過快造成，冷卻速度越快，冰晶損傷越大。 

 溶液損傷解說認為隨著溫度的下降，細胞外部的水分會先結(jié)冰，從而使得未結(jié)冰的溶液

中電解質(zhì)濃度升高，細胞膜上的脂質(zhì)會因長時問暴露在高溶質(zhì)的溶液中而受到損壞，細胞發(fā)

生滲漏，導(dǎo)致在復(fù)溫時大量水分滲入細胞內(nèi)造成細胞死亡。這種因保存溶液溶質(zhì)濃度增高而

致的細胞損傷被稱為溶液損傷(Solution damage)。溶液損傷是由冷卻速度過慢，使細胞在高

濃度的溶液中暴露的時間過長而造成，冷卻速度越慢，此損傷越嚴重。 

  作者：老談