基因編輯T7 核酸內(nèi)切酶I

T7 Endonuclease I

T7 核酸內(nèi)切酶I

高檢測(cè)靈敏度高

產(chǎn)物可直接電泳檢測(cè)

T7 Endonuclease I 是克隆重組T7 Endonuclease I基因后在大腸桿菌中表達(dá)純化的高活性蛋白，能識(shí)別并切割不*配對(duì)DNA、十字型結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或DNA 分叉點(diǎn)、異源雙鏈DNA 及低速切割帶切刻位點(diǎn)的雙鏈DNA。酶切位點(diǎn)為錯(cuò)配5’ 端的一、二或三個(gè)磷酸二酯鍵。

-20℃保存

基因編輯T7 核酸內(nèi)切酶I

Q1：做基因編輯，酶切驗(yàn)證編輯成功，但是測(cè)序結(jié)果卻不正確（假陽(yáng)性）。

A1：編輯完成之后，提取基因組，做PCR擴(kuò)增目的片段，利用T7核酸內(nèi)切酶進(jìn)行驗(yàn)證，有目的條帶，連T載做轉(zhuǎn)化，菌檢測(cè)序。建議在菌檢結(jié)束之后，利用菌檢產(chǎn)物再做一次酶切驗(yàn)證是否將有效片段連入載體，如果酶切驗(yàn)證是陽(yáng)性的，則可以測(cè)序。

Q2：該實(shí)驗(yàn)反應(yīng)溫度的上限是多少？

A2: 反應(yīng)溫度超過(guò)42℃時(shí)，會(huì)增加非特異性核酸酶活性。避免反應(yīng)溫度超過(guò)55℃，否則會(huì)導(dǎo)致酶活性降低。