人正常肝細胞傳代1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2天換一次液；

2.待細胞長滿瓶底面積80%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:2到1:3；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于室溫預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于室溫孵育消化（*次消化需置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化時間，記錄zui佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1000rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。（具體根據(jù)隨貨說明書進行操作）

人正常肝細胞凍存條件：*培養(yǎng)基+FBS+DMSO

(備注：建議使用本公司的培養(yǎng)條件，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預(yù)熱后使用。)

保存條件：液氮存儲