超博（sCD14）ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理： 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬白細(xì)胞介素 6（IL-6）水平。用純化的豬白細(xì) 胞介素 6（IL-6）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入豬白細(xì)胞 介素 6（IL-6），再與 HRP 標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹 底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬白細(xì)胞介素 6（IL-6）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長 下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬白細(xì)胞介素 6（IL-6）含量。 試劑盒組成請聯(lián)系公司技術(shù)小葉 樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集 上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次 離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程 中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn) /分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞 濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分 鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將 標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢 測，其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上 進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣 品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl （樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃 動混勻。 3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl，空白孔除外。 4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。 5. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。 6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。 7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯 色 15 分鐘. 8. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液 后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 注意事項(xiàng)： 1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物請避光保存。 7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9． 本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。 計算： 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值 代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。 2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于 10%和 10% 。 檢測范圍： 25 pg/mL - 800 pg/mL 靈敏度： 低檢測濃度小于 1.0 pg/mL 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存： 2-8℃。

超博（sCD14）ELISA試劑盒