一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在70%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與ZetaLife公司AdvancedDNARNA貨號(hào)AD600150轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無(wú)血清的培養(yǎng)基里面，我后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件）。

4、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

三、注意事項(xiàng)：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE6、FuGENEHD、Effectene等；

2細(xì)胞培養(yǎng)ZetaLifez7181-500胎牛血清，Gibco的DMEM;

四、美國(guó)ZetaLife公司AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

數(shù)量

報(bào)價(jià)

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD600050

0.5

1

2390

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD600075

0.75

1

2890

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD600500

5ML

1

AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑

AD601000

10ML

1