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　　PCR熒光定量的原理：
 

　　以探針?lè)?strong>PCR熒光定量為例：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
 

　　傳統(tǒng)的PCR進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，擴(kuò)增反應(yīng)后需要進(jìn)行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽(yáng)性，使其應(yīng)用受到限制。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動(dòng)化程度高和無(wú)污染的特點(diǎn)，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
 

　　在PCR擴(kuò)增反應(yīng)的最初數(shù)個(gè)循環(huán)里，熒光信號(hào)變化不大，接近一條直線，這樣的直線即是基線，這條線是可以自動(dòng)生成也可以手動(dòng)設(shè)置的。之后反應(yīng)會(huì)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期，這個(gè)期間擴(kuò)增曲線具有高度重復(fù)性，在該期間，可設(shè)定一條熒光閾值線，它可以設(shè)定在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段任意位置上。
 

　　PCR熒光定量是具有劃時(shí)代意義的技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、快速方便、靈敏度高、重復(fù)性好、污染率低等優(yōu)點(diǎn)，不僅應(yīng)用于基因表達(dá)解析，還廣泛應(yīng)用于SNP分型解析、物種鑒定、病毒和病原菌的檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因食品的定量分析、導(dǎo)入基因拷貝數(shù)的解析等諸多領(lǐng)域。